来源时间为：2020-4-21
1.6粪样及胃肠道微生物菌群的测定
于21，28日龄，每组分别采集5头仔猪的无污染粪样5ｇ，于4℃保存，用于乳酸菌和大肠杆菌的活菌数测定。具体操作如下：分别准确称取0.5ｇ样品加入4.5mL生理盐水（稀释液测定大肠杆菌）或MRS溶液（稀释液测定乳酸菌），依次进行10倍梯度稀释至1×10-6。采用稀释涂布平板法和伊红－美蓝固态培养基测定大肠杆菌活菌数；利用厌氧管和固态MRS培养基测定乳酸菌活菌数。2种菌分别在37℃培养48ｈ，然后进行计数。
1.7血清生化指标的测定
在仔猪21日龄断奶当天，每组选取5头仔猪进行前腔静脉采血，血液于4℃倾斜放置过夜，分离上层血清于－20℃保存备用。利用全自动血液生化分析仪进行血清各项指标的测定。
1.8数据统计和分析
数据分析采用SPSS软件进行方差统计分析，各处理组间平均值采用Duncan氏多重比较进行差异显著性检验，结果用（ｘ±ｓｘ）表示，以P<0.05表示差异显著。
2、结果
2.1益生菌对哺乳仔猪生产性能的影响
2.1.1益生菌对哺乳仔猪增重的影响
由表1可知，试验组仔猪21，28日龄平均日增重均显著高于对照组（P<0.05），其中以试验Ⅲ组最高，3个试验组之间差异不显著（P0.05）。
2.1.2益生菌对仔猪腹泻率和死亡率的影响
由表2可知，试验Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ组21日龄仔猪死亡率分别比对照组降低了58.46％，43.13％，64.82％（P<0.05），腹泻率分别比对照组降低了53.59％，53.10％，55.30％（P<0.05）；断奶7ｄ内3个试验组仔猪腹泻率分别比对照组降低了62.60％，51.93％，70.26％（P<0.05）。
2.2益生菌对仔猪粪样及胃肠道消化酶活性和pH值的影响
从表3可知，复合益生菌组仔猪胃、十二指肠和结肠中蛋白酶活性显著高于对照组（P<0.05），十二指肠和盲肠中淀粉酶活性也显著高于对照组（P<0.05），而胃和十二指肠中的pH值则显著低于对照组（P<0.05）。表4结果表明，除试验Ⅲ组28日龄仔猪粪样蛋白酶活力显著高于对照组和试验Ⅰ组外（P<0.05），其余各组不同年龄段仔猪粪样中蛋白酶和淀粉酶活性均无显著性差异（P0.05）。
2.3益生菌对仔猪粪样及消化道微生物菌群的影响
由表5可知，复合益生菌可显著提高仔猪直肠内容物中乳酸菌的数量，降低回肠中大肠杆菌数量（P<0.05），对其余各肠段内容物中乳酸菌和大肠杆菌数量皆无显著性影响（P0.05）。表6的结果显示，试验Ⅱ，Ⅲ组28日龄仔猪粪样中乳酸菌数量显著高于对照组（P<0.05），但益生菌对仔猪粪样中大肠杆菌数量皆无显著性影响（P0.05）。
2.4益生菌对仔猪血清生化指标的影响
表7结果表明，试验Ⅲ组仔猪血清中ALT和AST指标均显著低于对照组（P<0.05），而IgA含量显著高于对照组（P<0.05）；试验Ⅰ、Ⅱ组血清IgG含量均显著高于对照组（P<0.05），而试验Ⅲ组与对照组相比差异不显著。试验Ⅲ组血清中谷氨酰转肽酶（GGT）含量与对照组相比差异不显著，但显著低于试验Ⅰ，Ⅱ组（P<0.05）；其他血清生化指标各处理组间无显著性差异（P0.05）。
3、讨论
3.1益生菌对仔猪生长性能及腹泻率和死亡率的影响
益生菌进入动物肠道后与机体存在互利共生的关系，益生菌依赖动物机体的环境生存，同时能帮助机体利用不能直接利用的营养物质，将其转化成易于吸收的小分子化合物供机体利用，以此来提高动物的生长性能。大量的研究发现，添加0.1％复合乳酸菌的仔猪日增重和腹泻率与抗生素组相比差异不显著，同时又显著高于普通对照组，并且血清IGA的含量显著高于对照组和抗生素组；通过对出生仔猪灌服植物乳杆菌及复合益生菌制剂，均能显著降低仔猪腹泻率，并提高日增重；在仔猪日粮中添加0.3％乳酸菌和芽孢杆菌的复合制剂，发现能降低哺乳仔猪的腹泻率和死亡率。GIANG等研究表明，不同乳酸菌组合可改善仔猪肠道微生物区系，显著提高断奶2周内仔猪日采食量和日增重，而对断奶3～5周后的仔猪没有显著性影响。另据报道，给哺乳仔猪灌服屎肠球菌虽然可提高仔猪的日增重，但对仔猪的断奶体质量无显著性影响；同时还发现屎肠球菌虽可缓解腹泻的严重性，但对缩短腹泻病程及对腹泻的治疗无显著作用。不同研究由于所选用的菌种和饲养管理条件不同，会产生不同的试验结果。本研究结果与之前的大多数报道一致，充分说明益生菌在提高哺乳仔猪生长及降低腹泻率和死亡率方面的生物学功能，特别是对刚断奶仔猪的效果尤为明显，对于缓解因仔猪断奶所造成的胃肠道微生物区系紊乱和内环境应激具有重要意义。另外，本研究还发现复合益生菌对哺乳仔猪的益生功效与单一的干酪乳杆菌或粪肠球菌相比无显著性差别，可根据生产实际来选择使用单一或复合益生菌。
3.2益生菌对仔猪血清生化指标的影响
血清ALT和AST的活性是衡量肝脏生理状况的重要指标，当肝细胞受到损伤时，血清ALT的活性就会升高，同时AST／ALT的比值降低。本研究饲喂复合益生菌组猪血清ALT和AST含量与对照组相比明显降低，说明复合益生菌对肝脏功能有一定的保护作用。血清免疫球蛋白包括IgA、IgG和IgM等，由B淋巴细胞产生，是体液免疫的主要效应因子，具有预防和增强机体抗感染的能力，血清免疫球蛋白水平的高低是衡量体液免疫的重要指标。IgA是机体分泌到体液中的主要抗体，动物出生时主要是通过母乳获得免疫球蛋白（主要是IgA）来增强自身的免疫力。之前研究表明双歧杆菌与唾液乳杆菌组合可以显著提高28日龄仔猪血清免疫球蛋白（IgA，IgG和IgM）的含量。本研究也发现益生菌可以显著提高仔猪血清IgA和IgG的含量，这主要是由于益生菌具有激活肠道免疫应答系统的功能。通过对哺乳仔猪灌服益生菌有助于仔猪尽早地建立起自身的体液免疫系统，增强机体的抗病和抗感染能力，减少疾病发生。
3.3益生菌对仔猪胃肠道微生物菌群、pH值和酶活的影响
本研究发现，益生菌可在一定程度上提高仔猪直肠和粪便中乳酸菌的数量，而降低回肠中大肠杆菌的数量，可能是由于所灌服的干酪乳杆菌和粪肠球菌在胃肠道中定植、生长和繁殖，并占居优势地位所致。研究表明，通过在仔猪的饲料中加入微生态制剂，可显著提高胃肠道中乳酸菌数量而降低大肠杆菌数量。与本研究给乳仔猪灌服益生菌的结果一致，充分说明外源益生菌的引入可改变仔猪胃肠道的微生物区系，从而减少消化道疾病的发生。朱群等研究发现，添加复合益生菌（植物乳杆菌和枯草芽孢杆菌组合）的哺乳仔猪胃和十二指肠pH值显著降低，并发现益生菌组仔猪盲肠、空肠和回肠内容物中pH值与基础日粮和抗生素组相比均有所下降。本研究结果表明，益生菌组猪各肠道内容物的pH值均低于对照组，其中胃和十二指肠的pH值下降显著，主要是由于益生菌自身产生的有机酸所致，这种酸性肠道环境可抑制致病菌的生长，有利于仔猪健康。此外，通过猪消化道中蛋白酶和淀粉酶活力的变化可以看出，添加益生菌可显著提高猪十二指肠中这2种酶的活力。由于干酪乳杆菌和粪肠球菌皆不分泌蛋白酶和淀粉酶，因而这2种酶活的提高可能是由于添加的益生菌刺激了肠道中可分泌这类消化酶的微生物的生长和繁殖所致，有利于营养物质消化、吸收和利用率的提高。
本研究结果表明，定期地给哺乳仔猪灌服单一的干酪乳杆菌或粪肠球菌及2种组合菌，能够显著提高哺乳仔猪的日增重和血清免疫球蛋白IGA和IgG的水平，降低仔猪腹泻率和死亡率；复合益生菌可提高胃肠道中蛋白酶和淀粉酶的活性及乳酸菌数量，并降低大肠杆菌数量。该研究对哺乳仔猪的健康生产具有一定的指导意义。
